劉亞明,牛 欣,馮前進(jìn),王世民,曹月英

( 北京中醫(yī)藥大學(xué), 北京 100029, 1 山西中醫(yī)學(xué)院, 太原 030024,2 山西省中醫(yī)藥研究院, 太原 030012)

提 要 本文對(duì)老年小鼠灌服龜齡集0. 125g/ kg、0 . 25g/ kg 和黨參0. 5g/ kg 50 天, 測(cè)定SOD, MDA、GSH- PX、NA 和DA, 結(jié)果顯示, 龜齡集能明顯提高老年小鼠SOD 和GSH- Px 的含量, 減少MDA 含量, 龜齡集還能明顯增加老年小鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量,表明龜齡集有抗衰老作用。 

關(guān)鍵詞 龜齡集; 抗氧化; NE; DA

龜齡集有增強(qiáng)小鼠免疫功能, 促進(jìn)性激素、腎上腺皮質(zhì)激素合成, 促進(jìn)小鼠RNA、蛋白質(zhì)合成, 增加心血排出量, 抗疲勞、抗缺氧和保肝等作用。我們發(fā)現(xiàn)龜齡集有顯著的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用, 為了進(jìn)一步觀察龜齡集的抗衰老作用及機(jī)理, 本文對(duì)老年小鼠中樞神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素( NE) 、多巴胺( DA)及SOD、GSH- Px、MDA 含量進(jìn)行了測(cè)定, 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料

1. 1 試驗(yàn)藥物龜齡集散劑, 山西中藥廠產(chǎn), 批號(hào)990713。

1. 2 動(dòng)物 昆明種小鼠, 體重33 ? 2g , 雌雄各半, 由山西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1. 3 試劑 去甲腎上腺素( NB) 重酒石酸鹽( 中國(guó)藥品生物制品檢定所, 批號(hào)9402) ; 多巴胺( DA) 鹽酸鹽( 中國(guó)藥品生物制品檢定所, 批號(hào)9404) ; SOD 試劑盒、MDA 試劑盒、GSH- Px 試劑盒( 均購(gòu)自南京建成生物工程研究所, 批號(hào)990828) 。

1. 4 儀器 高效液相色譜儀LC- 10Avp 系列( 日本島津) , LECD-6A 電化學(xué)檢測(cè)器。

1. 5 方法

1. 5. 1 標(biāo)準(zhǔn)液配制 取去甲腎上腺素( NE) 、多巴胺( DA) 標(biāo)準(zhǔn)液分別配成濃度為1g / L 的標(biāo)準(zhǔn)液, 貯存于- 20 e 冰箱內(nèi), 分析時(shí)配成濃度為0. 1mg/ L 的應(yīng)試液。

1. 5. 2 色譜測(cè)定條件 熒光檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)設(shè)置為280nm, 發(fā)射波長(zhǎng)設(shè)置為315nm, 室溫保持在25e 左右, 以峰面積定量計(jì)算。并建立標(biāo)準(zhǔn)品的分離色譜圖及NE、DA 工作曲線及線性方程式。

1. 5. 3 分組與測(cè)定 將老年小鼠( 3 月齡) 50 只, 隨機(jī)分5 組:即老齡組, 龜齡集小、中劑量組和黨參組。另取10 只( 1. 5 月齡) 小鼠為對(duì)照組。小鼠每日灌服蒸溜水或藥物飼養(yǎng)50d。處死小鼠取血分離血清參照文獻(xiàn)[ 3] 方法分別進(jìn)行小鼠MDA、SOD及GSH- Px 含量測(cè)定。另將動(dòng)物斷頭置于冰臺(tái)上, 迅速取出腦組織并快速保存于液氮中備測(cè)。另將小鼠全腦( 除去小腦) 稱重后, 放入含0. 5mol/ L EDTA、0. 01% 半胱氨酸的0. 4mmol/ LHClO4 冷溶液中勻漿, 于4e 10000g 離心10mmin。取上清液與1/ 2 體積的鉀鹽溶液混合, 冰溶液中靜置10min。進(jìn)樣前用0.45Lm 的濾膜過(guò)濾, 10000g 高速離心10min, 取上清液20Ll 測(cè)定NE、DA 含量。

2 結(jié)果

龜齡集對(duì)老年小鼠血清中MDA、SOD 及GSH- Px 含量的影響見(jiàn)表1。

3 討論

脂質(zhì)過(guò)氧化是指機(jī)體代謝產(chǎn)生的自由基誘導(dǎo)生物膜中不飽和脂肪酸發(fā)生氧化反應(yīng), 形成過(guò)氧化產(chǎn)物MDA。衰老可使細(xì)胞膜磷脂分子產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化。MDA 能使膜蛋白、酶發(fā)生交聯(lián)反應(yīng), 使膜通透性增加, 導(dǎo)致細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、功能和代謝發(fā)生改變,對(duì)機(jī)體造成損害。血清MDA 含量多少能反映細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化的強(qiáng)弱, 龜齡集能明顯抑制衰老動(dòng)物血清MDA 生成和明顯。

降低衰老小鼠血清MDA 含量, 表明具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用。另外已知自由基( 超氧離子自由基和羥自由基) 是啟動(dòng)脂質(zhì)過(guò)氧化的關(guān)鍵因素, GSH- Px 作為一種抗氧化與抗自由基物質(zhì), 其含量越下降細(xì)胞衰老程度就越嚴(yán)重。SOD 是超氧陰離子自由基的清除劑, 可抑制自由基啟動(dòng)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。龜齡集可明顯提高衰老小鼠血清SOD 含量及GSH- Px 含量, 這一結(jié)果與我們以往的報(bào)告相似[ 3] , 表明龜齡集具有顯著的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用。

一般認(rèn)為NE 和DA 的合成是腎上腺素能神經(jīng)元攝取血中的酪氨酸為原料, 在胞漿內(nèi)首先羥化成多巴, 再脫羥生成多巴胺, 然后進(jìn)入囊泡, 經(jīng)B- 羥化而生成NE。當(dāng)腦內(nèi)NE、DA 含量下降時(shí)則表明腦功能衰退。同時(shí)由于衰老動(dòng)物的消化功能減退而使DA、NE 的前體物質(zhì)攝入減少, 則往往伴隨有酪氨酸羥化酶活性或多巴胺脫羥酸活性降低, 表現(xiàn)為老齡小鼠腦內(nèi)的NE、DA 含量下降。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明龜齡集有明顯提高NE、DA 含量, 提示其有顯著的抗衰老作用。有報(bào)道龜齡集有防止大鼠小腦皮質(zhì)突觸素丟失的作用, 這與我們的研究結(jié)果基本一致。至于其作用機(jī)致是增加NE、DA 單胺遞質(zhì)的重?cái)z取, 還是影響遞質(zhì)合成酶或分解酶的活性, 則有待進(jìn)一步研究。

TAG：龜齡集 龜齡集作用 龜齡集效果