血管穩(wěn)定對于腫瘤生長和轉(zhuǎn)移過程的重要意義

Suleyman Erguna,*, Derya Tilkia, Leticia Oliveira-Ferrera,Gunter Schuchb, Nerbil Kilicb

Received 11 June 2005; accepted 23 June 2005

摘要：本小型綜述重點(diǎn)突出了血管穩(wěn)定化的作用，而血管穩(wěn)定化顯然是由于隸屬于促

血管生成類和抗血管生成類因子介導(dǎo)的。眾所周之，血管形成素－1具有促血管生成的特性，而內(nèi)皮抑素起到抗血管生成的作用。但這兩種在試驗(yàn)?zāi)[瘤模型中都具有抑制腫瘤生長的作用。它們作用機(jī)理的共同點(diǎn)就是它們都是對血管穩(wěn)定性和血管滲透性起作用的重要因素，它們不僅對腫瘤的血管生成作用，而且通常也對組織血管生成作用具有極重要的影響。血管形成素－1 和內(nèi)皮抑素都減少了血管滲透能力，而促進(jìn)了血管穩(wěn)定過程。在腫瘤的實(shí)驗(yàn)性的治療中，采用如內(nèi)皮抑素這類血管生成拮抗劑，顯著提高了血管穩(wěn)定作用。它們抑制了腫瘤生長和可能出現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移。對致力于腫瘤血管化作用和抗腫瘤血管生成治療的科學(xué)家來說，了解血管穩(wěn)定作用的時(shí)間和空間過程是及其重要的挑戰(zhàn)。

1. 引言

腫瘤血管系統(tǒng)的一個(gè)基本的特性就是缺少血管體系，這表明發(fā)生在正常血管發(fā)展過程中的形態(tài)學(xué)的再塑性過程在腫瘤的血管發(fā)生中或是受損的或是沒有發(fā)生[1-3]。生理?xiàng)l件下以及腫瘤的組織血管化作用是由血管發(fā)生和/或血管發(fā)生引起的。從已存在的血管上萌芽出新的血管定義為血管發(fā)生[4，5]，而出生后的血管發(fā)生是內(nèi)皮前體細(xì)胞形成新的血管的過程[6-8]。

新生血管發(fā)展整個(gè)復(fù)雜過程中的主要步驟包括內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和增殖過程以及毛細(xì)血管的形成[9]。隨后的基底膜的發(fā)生和內(nèi)皮周細(xì)胞，毛細(xì)血管周細(xì)胞和大血管的平滑肌細(xì)胞整合入血管壁都是導(dǎo)致血管成熟的血管再塑性過程中的基本步驟[1，10-12]。這個(gè)成熟過程的結(jié)束是由小血管和大血管形成，可以滿足例如形成流體靜力壓、血管滲透能力和組織灌注率等功能需要的血管體系的形成。目前血管發(fā)生研究的注意力主要集中于內(nèi)皮細(xì)胞的遷徙、增殖和毛細(xì)血管的形成。相應(yīng)的腫瘤抗血管生成治療也主要針對內(nèi)皮細(xì)胞的這些特性。然而，血管壁的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定作用的機(jī)制目前我們了解甚少，但是在最近幾年中已經(jīng)成為血管研究中的非常重要的熱點(diǎn)[1-3，11，13-18]。對血管穩(wěn)定作用是否影響和怎樣影響腫瘤生長和轉(zhuǎn)移這個(gè)問題就更知之甚少。此外，對于像腫瘤、糖尿病、黃斑變性、各種血管畸形、炎癥和局部缺血組織的最終血管再通這些一系列以血管異常為主要特征疾病，血管穩(wěn)定過程的調(diào)節(jié)看起來都是重要的。

2. 腫瘤組織中的血管穩(wěn)定和血管成熟

正常的一個(gè)成熟血管床由分化后的大血管和微血管等血管組成，這包括動脈、靜脈、小動脈、小靜脈和末端毛細(xì)血管。除了被腫瘤侵犯包含的已存在的血管外，不管是惡性腫瘤還是良性腫瘤中，這樣一種已分化的血管床都沒有存在腫瘤中[1，3，19]。“血管成熟”、“血管穩(wěn)定”或“血管正常化”這些術(shù)語既用于不同的也用于同樣的血管結(jié)構(gòu)狀態(tài)。由McDonald和其同事進(jìn)行的詳細(xì)研究證明大部分腫瘤血管系統(tǒng)已經(jīng)存在基底膜和內(nèi)皮周細(xì)胞。由于缺乏進(jìn)一步分化和周細(xì)胞的規(guī)則地整合進(jìn)入血管壁和血管壁成分的重排，腫瘤血管系統(tǒng)的基底膜和內(nèi)皮周細(xì)胞仍然保持結(jié)構(gòu)的不成熟[11，13]。此外，與正常血管系統(tǒng)相比，腫瘤血管系統(tǒng)也存在結(jié)構(gòu)的不正常。因而，在一些最近的出版物中并不贊成在“正常化”這個(gè)概念使用中把血管穩(wěn)定和血管成熟分開使用。特別必要的是在此領(lǐng)域要避免這一概念的進(jìn)一步混淆。因而，我們建議使用“血管成熟”定義為大血管和微血管的正確分化為血管床的過程，而新血管完成由或多或少的內(nèi)皮間結(jié)構(gòu)、基底膜和一層內(nèi)皮周細(xì)胞的結(jié)構(gòu)狀態(tài)稱之為“血管穩(wěn)定作用”。血管穩(wěn)定作用是成熟過程中的一步，但是這一階段中血管依然需要幾步重新塑形的步驟才能成熟。不過，腫瘤的一部分血管能夠明顯地達(dá)到血管形態(tài)發(fā)生階段，但是不能進(jìn)入進(jìn)一步的血管成熟階段。因而，區(qū)分這些過程不僅僅是一個(gè)技術(shù)問題，更進(jìn)一步意義上說，這對更好地理解腫瘤血管生物特性和腫瘤抗血管生成治療都是非常重要的。

3. 血管穩(wěn)定和腫瘤生長

通常大家認(rèn)為，腫瘤血管是不穩(wěn)定的和不正常滲漏的[19，20]。大分子的外滲提供了一種基質(zhì)擴(kuò)大了血管芽苞的形成的可能[19]。許多出版物也認(rèn)為腫瘤血管床是由不同形態(tài)發(fā)生血管結(jié)構(gòu)組成。無論是哪種類型的腫瘤，腫瘤組織中的腫瘤血管基本上存在三種類型：

（1）僅由內(nèi)細(xì)胞無或僅存在未充分形成的基底膜，但沒有整合內(nèi)皮周細(xì)胞形成的

新生血管芽苞（圖1A）。

（2）固定在部分形成的基底膜和部分排列的內(nèi)皮周細(xì)胞上由內(nèi)皮細(xì)胞排列成的毛細(xì)血管（圖1B）和（3）毛細(xì)血管（圖1C）和具有基底膜及其固定在上面的內(nèi)皮細(xì)胞和內(nèi)皮周細(xì)胞或少量整合了少量平滑肌細(xì)胞的較大直徑的血管（圖1D）。只有最后一種的血管結(jié)構(gòu)被認(rèn)為是穩(wěn)定的。哪一種血管類型在腫瘤中占統(tǒng)治地位顯然依賴腫瘤內(nèi)的微環(huán)境。然而，我們要說明的是在人Leydig（睪丸間質(zhì)細(xì)胞）細(xì)胞腫瘤，盡管存在非常高的血管密度，這種非常低度惡性腫瘤的大部分血管是穩(wěn)定的[16]。根據(jù)這些數(shù)據(jù)，我們假定血管穩(wěn)定可能不利于腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。在一個(gè)腫瘤中調(diào)控血管的過程如此復(fù)雜，使得研究腫瘤組織中調(diào)節(jié)血管穩(wěn)定的分子機(jī)制是困難的。過去4-5 年中的數(shù)據(jù)的累積增加這一問題顯著性的關(guān)注[11，14，21，22]。相應(yīng)的，我們把近來在抗血管生成治療下腫瘤血管的部分正常化稱作“正常化”[2，15]。這引起這樣的假設(shè)，抗腫瘤血管生成治療可能會打開改善放療和化療效果上的一個(gè)“治療窗口”[2，15]。我們顯示了血管形成抑制劑內(nèi)皮抑素穩(wěn)定了新血管芽苞，猜測這將會使新血管從生成血管向靜止的表型轉(zhuǎn)換（圖2A，B）。另一方面，血管形成素－1（Ang1）的過表達(dá)，通過整合內(nèi)皮周細(xì)胞進(jìn)入血管壁和顯示促血管生成特性作為新初生血管的重新塑形和穩(wěn)定的基本因素，抑制了腫瘤的生長而不是促進(jìn)它的生長[22]。近來研究發(fā)現(xiàn)的那些被強(qiáng)調(diào)的數(shù)據(jù)顯示，一種能夠結(jié)合血管形成素－1 位點(diǎn)的包含孤立纖維蛋白素原樣受體的切去頂端的血管形成素－1 變異單體和血管形成素－1，均能穩(wěn)定血管，避免異常的血管滲漏和降低血管密度[23]。血管形成素－1 和內(nèi)皮抑素的共同點(diǎn)看起來都能重新塑造和穩(wěn)定新生血管，而它們的差異在于如內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和管腔的形成等中發(fā)揮不同的功能。內(nèi)皮抑素阻斷了內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，減少了血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)的內(nèi)皮管腔的形成[14]，而血管形成素－1 則是都增強(qiáng)這些作用[24，25]。血管穩(wěn)定影響到血管滲透性和血流的功能。血管形成素－1 阻斷了血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)的血管滲漏[26]。我們目前的數(shù)據(jù)顯示內(nèi)皮抑素通過穩(wěn)定血管壁（Nomi and Schuch 等，待發(fā)手稿）阻止了血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和凝血酶原激活因子介導(dǎo)和腫瘤誘導(dǎo)的異常血管滲漏。對抗血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子或凝血酶原激活因子，內(nèi)皮抑素保護(hù)了內(nèi)皮細(xì)胞間的連接和基底膜以及在內(nèi)皮細(xì)胞和內(nèi)皮周細(xì)胞間的直接接觸。我們最近的證據(jù)顯示的治療中應(yīng)用的內(nèi)皮抑素明顯地集聚在腫瘤血管壁內(nèi)，在正常組織中卻沒有集聚[27]這表明了內(nèi)皮抑素在新生血管結(jié)構(gòu)調(diào)整中的作用。另有發(fā)現(xiàn)支持這一觀點(diǎn)，通過減少血管通透性過高，內(nèi)皮抑素顯示可以阻斷血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜剝離[28]。更有近來的研究證據(jù)支持這一點(diǎn)，缺乏內(nèi)皮抑素前體物質(zhì)-膠原18 的人工破壞特定基因的鼠表現(xiàn)出升高的血管滲透性或血管滲漏[29]。顯然，血管形成素－1 和內(nèi)皮抑素協(xié)同作用于血管壁的穩(wěn)定和減少血管滲漏。最終，這兩種因子遏制了試驗(yàn)?zāi)[瘤的的腫瘤生長和轉(zhuǎn)移[22，30]。近來一篇文章顯示了血管滲漏對腫瘤生長的重要性。可能是由于穩(wěn)定了內(nèi)皮屏障，通過一種影響一氧化氮合酶的因子-Cavtratin（凱綽琳），從而阻斷了血管通透性過高，減少了活體內(nèi)腫瘤的生長。但這又提出了一個(gè)問題是不是血管穩(wěn)定是抗血管生成和抗腫瘤血管生成的本質(zhì)？如果答案是，血管穩(wěn)定又怎樣抑制了腫瘤生長？稍微違反直覺的考慮一下，正如我們所顯示的內(nèi)皮抑素這些現(xiàn)有證據(jù)表明，血管穩(wěn)定可能是逆轉(zhuǎn)腫瘤誘導(dǎo)的異常血管滲漏和減少血管生成潛能的關(guān)鍵(Nomi and Schuch 等, 待發(fā)手稿) [14]。對不同試驗(yàn)和人類的形態(tài)學(xué)評價(jià)揭示腫瘤血管的穩(wěn)定改變了與血管相關(guān)的腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)以及伴隨的腫瘤壞死的增加。在腫瘤的邊緣區(qū)域，腫瘤細(xì)胞群被一團(tuán)高密度的未穩(wěn)定血管網(wǎng)絡(luò)包圍（圖3A），這里沒有看到壞死區(qū)域。與此相反，在那些部分穩(wěn)定血管系統(tǒng)的腫瘤區(qū)域，只有包圍穩(wěn)定血管周圍5－9 層腫瘤細(xì)胞呈圓筒狀存活，而遠(yuǎn)離這些區(qū)域的腫瘤細(xì)胞則壞死（圖3B，C）。由這樣穩(wěn)定的大直徑血管分枝的小血管則發(fā)現(xiàn)退化了（圖3D）。有趣的是，這樣有穩(wěn)定血管和腫瘤壞死的區(qū)域大部分發(fā)現(xiàn)在惡性腫瘤的中心而在象睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤或良性前列腺異常增生中則沒有發(fā)現(xiàn)。在幾個(gè)實(shí)驗(yàn)性腫瘤中，我們觀察在內(nèi)皮抑素抗腫瘤血管生成的治療下到從腫瘤中心向腫瘤邊緣區(qū)域顯著的具有穩(wěn)定血管和腫瘤壞死的區(qū)域，重點(diǎn)指出了在血管生成抑制、血管穩(wěn)定和腫瘤抑制的潛在關(guān)系。

圖1 腫瘤血管穩(wěn)定性的超微結(jié)構(gòu)（A）一個(gè)不穩(wěn)定的腫瘤邊緣區(qū)域的血管由內(nèi)皮細(xì)胞（EC）和形成的部分基底膜（箭頭）組成。在血管形成的這一時(shí)期看不到內(nèi)皮細(xì)胞之間的特異連接區(qū)。（B）一個(gè)腫瘤邊緣區(qū)域部分穩(wěn)定的的血管由血管由形成基底膜的內(nèi)皮細(xì)胞和圍內(nèi)皮細(xì)胞（PEC）組成。（C）在腫瘤中心區(qū)域的穩(wěn)定的血管顯示了內(nèi)皮細(xì)胞間的連接（箭號）和基底膜（箭頭），其中內(nèi)皮細(xì)胞（EC）和圍內(nèi)皮細(xì)胞（PEC）都存在。（D）腫瘤中心區(qū)域的大血管的血管壁結(jié)構(gòu)由具有內(nèi)皮細(xì)胞間連接（箭號）的內(nèi)皮細(xì)胞（EC）和一層緊密連接內(nèi)皮細(xì)胞的平滑肌細(xì)胞（SMC）組成。Er：紅細(xì)胞。

圖2 內(nèi)皮抑素的血管穩(wěn)定作用（依據(jù)[14]）（A）在新生血管壁可以檢測到內(nèi)皮抑素（ES）的增加。（B）內(nèi)皮抑素定位于內(nèi)皮細(xì)胞間連接和血管壁的基底膜的透明板區(qū)域的超微結(jié)構(gòu)。這一假說認(rèn)為內(nèi)皮抑素作用于新血管的穩(wěn)定，使它們從血管生成向休眠表型的轉(zhuǎn)換。這一過程會減少血管生成和血管滲漏的活性。

圖3 腫瘤組織內(nèi)的血管穩(wěn)定作用。（A）腫瘤邊緣區(qū)域的腫瘤細(xì)胞群是由圍繞在腫瘤細(xì)胞群落（虛線）周圍的致密毛細(xì)血管網(wǎng)（箭號）來提供營養(yǎng)。（B）在腫瘤中心，遠(yuǎn)離穩(wěn)定血管的腫瘤細(xì)胞可以見到大量壞死，只有那些緊密靠近穩(wěn)定血管周圍的腫瘤細(xì)胞才能形成組織。（C）這一區(qū)域高倍鏡下觀，只有穩(wěn)定血管（*）周圍的5-9 排腫瘤細(xì)胞（虛線）可以健康存活，這一區(qū)域以外的腫瘤細(xì)胞發(fā)生了壞死。（D）這一區(qū)域顯示了從穩(wěn)定血管（*）分支出來的小的退化血管（箭號）。

4. 血管穩(wěn)定與血管灌注

基于這些觀察，我們假定血管穩(wěn)定不僅改變了腫瘤組織的血管滲透性，也改變了腫瘤組織的血管灌注和血流。使用活體顯微鏡檢查實(shí)驗(yàn)性腫瘤新生血管形成的功能性觀察中表明腫瘤血管連續(xù)地達(dá)到一種穩(wěn)定態(tài)。在這樣有大直徑腫瘤血管，血流和組織灌注顯著得提高和使大血管更大同時(shí)伴隨著小血管的退縮[32]。因此，我們認(rèn)為穩(wěn)定化血管的優(yōu)先灌注導(dǎo)致了未穩(wěn)定血管的灌注不足。這將隨后導(dǎo)致未穩(wěn)定血管周圍腫瘤組織的血供不足從而導(dǎo)致腫瘤壞死（圖4）。另外，因?yàn)槲捶�(wěn)定血管的功能缺失，它們的灌注不足可能會導(dǎo)致它們的退化。這又將促進(jìn)腫瘤的進(jìn)一步壞死。傷口愈合的研究證據(jù)也支持這一點(diǎn)，因?yàn)樵趦?nèi)皮抑素治療下瓦解的血管的數(shù)目顯著增加而沒有耽擱傷口的愈合[33]。從這些討論的數(shù)據(jù)中我們可以得到這樣的假設(shè)，血管穩(wěn)定作用可能起到了抗血管生成和抗癌的本質(zhì)，而本質(zhì)上沒有正常組織的血管。因?yàn)檠�管建立了對抗腫瘤細(xì)胞通過的屏障，血管穩(wěn)定作用也可能通過血管壁減少了腫瘤的轉(zhuǎn)移潛力。此外，正如R. Jain[2]所說，血管穩(wěn)定可能提高了如化療或放療這些確定的治療過程的效果，可能會打開“治療的窗口”。

圖4 血管穩(wěn)定與腫瘤生長的關(guān)系。在抗血管生成藥物如內(nèi)皮抑素治療下，可以看到在血管壁中緊緊排列有圍內(nèi)皮細(xì)胞（PEC）的穩(wěn)定腫瘤血管大部分存生在腫瘤中心但是顯著延伸到邊緣區(qū)域。這伴隨著引人注目的血管退縮部分從而導(dǎo)致了明顯地血管密度的減少。這一過程顯著改變了腫瘤組織的灌注。在具有不穩(wěn)定血管的腫瘤邊緣，如箭號所示的整個(gè)血管床來提供灌注。而與此相反，在不穩(wěn)定血管不斷功能喪失和遭受退化時(shí)，具有大部分穩(wěn)定血管的腫瘤中心是由穩(wěn)定血管來提供血液循環(huán)。這可能會導(dǎo)致腫瘤組織的進(jìn)一步壞死。綠色：內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)層，灰色：血管基底膜。

5. 結(jié)論

總之，把非穩(wěn)定的血管轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定血管以及直接針對新生血管芽孢的治療策略的建立可能是抗癌治療的新途徑。仍然需要進(jìn)一步的工作來了解血管穩(wěn)定與失去穩(wěn)定的機(jī)理和它們影響腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的作用。另外，研究由于腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)的潛在補(bǔ)償機(jī)制也是必要的。對這些過程的進(jìn)一步認(rèn)識將幫助我們提高抗腫瘤血管生成治療的療效。