臨床試驗(yàn)研究環(huán)孢素A對(duì)早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲與遷移的影響及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。滋養(yǎng)細(xì)胞攜帶來(lái)自胎兒的外胚層抗原，是母胎界面唯一與母體免疫系統(tǒng)直接接觸的胎兒細(xì)胞，在母胎免疫耐受中發(fā)揮重要作用。許多病理性妊娠，如反復(fù)自然流產(chǎn)、妊高征及胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩等均伴有滋養(yǎng)細(xì)胞某些生物學(xué)功能異常。以CsA作為研究工具，觀察環(huán)孢素A對(duì)早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲與遷移的影響，并進(jìn)一步解析其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，對(duì)于解析CsA新的藥效機(jī)制，具有重要意義。

環(huán)孢素A對(duì)早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲與遷移的影響

　　目的 探討環(huán)孢素A（新山地明）（Cyclosporin A，CsA）對(duì)早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞及人滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系JAR侵襲與遷移的調(diào)控作用。

　　方法 應(yīng)用硅化聚乙酰胺吡咯烷酮（Percoll）密度梯度離心法，分離純化早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞，經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)鑒定其純度；采用transwell分析早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞及人JAR細(xì)胞系遷移及侵襲能力；通過Western blot觀察pERK1/2的表達(dá)；ELISA分析MAP激酶活性。細(xì)胞內(nèi)共轉(zhuǎn)染AP-1-Luciferase、NFκB-Luciferase、NFAT-Luciferase與Renilla Luciferase-SV40報(bào)告質(zhì)粒采用熒光素酶報(bào)告基因雙檢測(cè)系統(tǒng)分析各轉(zhuǎn)錄因子的啟動(dòng)子活性。

　　結(jié)果

　　（1）早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞在含0.001，0.01，0.1，1.0μmol/L CsA的細(xì)胞培養(yǎng)液中分別培養(yǎng)24h、48h及72h時(shí)遷移、侵襲能力均增強(qiáng)；以1.0μmol/L的CsA促進(jìn)作用最強(qiáng)，其中培養(yǎng)48h，CsA作用最顯著。而CsA濃度達(dá)10.0μmol/L時(shí)，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力下降。CsA條件性培養(yǎng)基也能增強(qiáng)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的遷移能力與侵襲性，且其作用強(qiáng)于CsA組；CsA及其條件培養(yǎng)基對(duì)JAR細(xì)胞系有類似的作用。

　　（2）TGF-β1、TGF-β2可抑制細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞固有的和CsA誘導(dǎo)的侵襲與遷移能力，TGF-β1中和性抗體可增強(qiáng)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞自身或CsA誘導(dǎo)的侵襲與遷移能力，TGF-β2中和性抗體可增強(qiáng)CsA誘導(dǎo)的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲與遷移能力，對(duì)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞自身的侵襲與遷移能力沒有明顯影響。而無(wú)論TGF-β1、TGF-β2或其中和性抗體對(duì)于JAR細(xì)胞系的侵襲與遷移能力均沒有影響。

　　（3）Western blot、ELISA顯示，CsA以時(shí)間和劑量依賴方式促進(jìn)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞ERK1/2的磷酸化和MAP激酶的活化。U0126預(yù)處理可抑制CsA誘導(dǎo)的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞ERK1/2的磷酸化和MAP激酶的活化。而NFAT抑制劑對(duì)CsA誘導(dǎo)的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞ERK1/2磷酸化和MAP激酶活化無(wú)顯著影響。

　　（4）CsA以時(shí)間和濃度依賴方式刺激細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞AP1、NF-κB啟動(dòng)子活性；抑制ionomycin+PMA誘導(dǎo)的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞NFAT啟動(dòng)子活化。

　　（5）MEK激酶抑制劑U0126以劑量依賴方式抑制滋養(yǎng)細(xì)胞ERK1/2磷酸化和MAP激酶活化的同時(shí)，抑制AP1、NF-κB啟動(dòng)子活性，抑制細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞固有的和CsA誘導(dǎo)的遷移能力與侵襲性。NFAT抑制劑單獨(dú)或與CsA合并使用都會(huì)促進(jìn)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞遷移與侵襲能力。但NFAT抑制劑單獨(dú)應(yīng)用作用低于CsA或CsA與NFAT抑制劑合并使用。

　　結(jié)論

　　（1）CsA呈時(shí)間劑量依賴方式活化MAPK/ERK1/2信號(hào)通路，促進(jìn)早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的體外侵襲、遷移能力。

　　（2）抑制細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞Ca2+/Calcineurin/NFAT信號(hào)通路是CsA促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞遷移能力與侵襲性的重要機(jī)制之一。

　　（3）CsA誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子AP-1、NF-κB活化可能參與CsA對(duì)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞體外生長(zhǎng)的調(diào)控作用。

　　（4）AP-1、NF-κB可能是CsA活化的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞MAPK/ERK1/2信號(hào)通路下游的轉(zhuǎn)錄因子。

　　（5）CsA誘導(dǎo)的MAPK/ERK1/2信號(hào)活化獨(dú)立于NFAT核轉(zhuǎn)位以及NFAT轉(zhuǎn)錄活性；CsA抑制的NFAT活性也不依賴于MAPK/ERK1/2信號(hào)活性。

　　（6）CsA對(duì)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的促侵襲、遷移能力可能不是通過TGFβ介導(dǎo)。

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