康惱靈由川芎、當歸、銀杏葉,淫羊藿等組成,功能活血化瘀、補腎益智,用于血管性癡呆的治療。研究表明,康惱靈能明顯提高癡呆模型動物學(xué)習(xí)記憶能力,改善與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白乙酰膽堿酯酶、神經(jīng)生長因子的表達。本研究對康惱靈抗缺血再灌注所致癡呆大鼠自由基損傷的保護作用及對凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2、caspase-3表達的影響進行探討,探究康惱靈對癡呆大鼠神經(jīng)元自由基損傷的保護作用及對caspase-3、Bcl-2表達的影響。
實驗的方法是建立血管性癡呆大鼠模型,康惱靈給藥干預(yù)后,用分光光度計檢測超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量,熒光分光光度計檢測caspase-3表達,流式細胞技術(shù)檢測Bcl-2的表達。
值得一提的是,血管性癡呆是多種因素參與的復(fù)雜病理過程,缺血再灌注損傷癡呆模型中自由基損傷有重要意義,氧自由基引起的組織脂質(zhì)過氧化損傷是其重要原因。缺血再灌注損傷后可產(chǎn)生高濃度活性氧(ROS),包括超氧陰離子自由基和NO等,氧自由基可損傷DNA,進而和其它機制一起最終導(dǎo)致細胞凋亡。細胞凋亡是caspase家族參與的復(fù)雜過程,NO及其類似物可通過改變線粒體膜的通透性,導(dǎo)致一系列caspase家族酶系的活化,從而導(dǎo)致細胞凋亡。Bcl-2基因是細胞凋亡的重要抑制基因,過高表達可防止或降低各種刺激如自由基、細胞因子等引起的細胞凋亡,其機理是通過抑制活性氧自由基的脂質(zhì)過氧化作用而發(fā)揮抗凋亡活性。有研究表明,補腎活血類中藥具有清除自由基的作用,而康惱靈恰恰是這一類補腎活血類中藥,因此,在清除自由基方面療效顯著。
本實驗結(jié)果表明,康惱靈能顯著降低模型動物腦組織中MDA含量,提高SOD、NO含量,SOD是機體清除自由基的重要酶類,通過清除多余自由基而保證人體代謝平衡。康惱靈還可增強缺血再灌注損傷后Bcl-2的表達,降低caspase-3的表達。說明康惱靈具有抗氧化作用,可抵抗缺血再灌注后自由基大量產(chǎn)生,腦組織受氧自由基的損害減輕,保護腦神經(jīng)細胞;并能調(diào)控凋亡、調(diào)節(jié)蛋白的表達,減少神經(jīng)細胞凋亡的發(fā)生。所以康惱靈預(yù)防腦神經(jīng)細胞凋亡的機制可能與減輕腦內(nèi)自由基水平、調(diào)控凋亡、調(diào)節(jié)蛋白的表達有關(guān)。