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孫波 徐雨

（中國藥物與臨床2012年7月第12卷第7期：944-945）

真皮乳頭毛細(xì)血管增生、擴(kuò)張是銀屑病的重要病理改變之一，與銀屑病的發(fā)生、持續(xù)存在及復(fù)發(fā)密切相關(guān)，但其機(jī)制至今尚未完全闡明。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測與血管生成相關(guān)的存活素（Survivin）及血管內(nèi)皮生長因子（vasclar endothelial growth factor，VEGF）在尋常型銀屑病皮損中的表達(dá)，以期探討兩者在其發(fā)病中的作用及意義。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源：尋常型銀屑病患者30例.均為門診患者，男性18例，女性12例；年齡20~57歲，平均34.5歲；病程3個月至15年，平均4.8年；取材部位為軀干、四肢部位皮損，其中軀干17例，四肢13例。所有患者均處于進(jìn)行期，并經(jīng)病理確診，且未服用過類固醇激素、免疫抑制劑及維A酸類藥物。取材前2周內(nèi)未使用藥物治療，同時排除伴有其他系統(tǒng)性疾病的病例。30例正常皮膚組織，男性17例，女性13例；取自整形外科手術(shù)切除的軀干、四肢部位皮膚，軀干15例，四肢15例；年齡18~55歲，平均33.7歲。2組間性別和年齡及取材部位差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.1.2 主要儀器及試劑：石蠟切片機(jī)為德國Leica公司產(chǎn)品，倒置光學(xué)顯微鏡為Olympus公司產(chǎn)品；兔抗人Survivin多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司、兔抗人VEGF多克隆抗體、SABC免疫組織化學(xué)試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色劑均購自武漢博士德生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本處理：所有標(biāo)本均在局部麻醉下手術(shù)獲取。標(biāo)本取材后立即置于中性甲醛固定液中固定，按組織病理技術(shù)常規(guī)行脫水并行石蠟包埋。切片機(jī)切為4 μm厚切片，置58℃烤箱2 h備用。

1.2.2 免疫組織化學(xué)：嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行操作，一抗Survivin多克隆抗體和VEGF多克隆抗體濃度均為1：100，以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照，用已知陽性切片做陽性對照。

1.2.3 結(jié)果判定及分析：顯微鏡下觀察以胞質(zhì)和（或）胞膜呈棕黃色為陽性細(xì)胞。將免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行顯微照相，每張切片隨機(jī)選取5個視野，用MIAS-2000圖像分析系統(tǒng)對結(jié)果進(jìn)行定量分析，測定陽性區(qū)域積分吸光度值（A），取其平均值，以此來反應(yīng)該標(biāo)本的表達(dá)強(qiáng)度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

計量資料以x(-)±s表示，用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。組間比較采用t檢驗，相關(guān)性分析用Pearson相關(guān)分析。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 Survivin表達(dá)：Survivin表達(dá)定位于胞質(zhì)，銀屑病組在除角質(zhì)層外的角質(zhì)形成細(xì)胞各層及乳頭層血管內(nèi)皮細(xì)胞均呈不同程度陽性表達(dá)（A值為13.5±1.2），而在健康對照組則呈陰性表達(dá)（A值為9.0±0.9）。2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=15.989，P＜0.01）。

2.2 VEGF表達(dá)：VEGF表達(dá)定位于胞質(zhì)，銀屑病組主要表達(dá)于棘層及乳頭層血管內(nèi)皮細(xì)胞（A值為14.2±1.2），而健康對照組僅在基底層有少量表達(dá)或陰性表達(dá)（ 值為9.4±1.1）。2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=16.341，P＜0.01）。

2.3 相關(guān)性分析：經(jīng)Pearson相關(guān)分析，VEGF與Survivin的表達(dá)呈正相關(guān)（r：0.623，P＜0.01）。

3 討 論

VEGF是一種重要的皮膚血管生成因子，由角質(zhì)形成細(xì)胞分泌，通過與其內(nèi)皮細(xì)胞上的特異性受體結(jié)合發(fā)揮促進(jìn)毛細(xì)血管增殖、誘導(dǎo)毛細(xì)血管芽生、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖和抑制凋亡等多種功能。在生理性和病理性血管生成過程中起關(guān)鍵作用。李勇堅等研究顯示銀屑病皮損中存在VEGF的高表達(dá)，且與其血管生成密切相關(guān)。本實驗結(jié)果顯示，在健康人皮膚中，VEGF僅在基底層有少量表達(dá)，而在進(jìn)行期的尋常型銀屑病皮損中，除角質(zhì)層外的角質(zhì)形成細(xì)胞各層及血管內(nèi)皮細(xì)胞等呈陽性表達(dá)，2組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。這表明，高表達(dá)的VEGF參與了銀屑病的發(fā)病，其促血管生成作用可能是銀屑病血管增生、擴(kuò)張的主要原因。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的成員，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子。近年來逐漸發(fā)現(xiàn)，Survivin除表達(dá)于多種腫瘤組織外還表達(dá)于具有角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的疾病中。如單純性苔蘚、脂溢性皮炎、尋常疣等。以往研究顯示，Survivin的高表達(dá)與銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞的病理性增生及淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等的持續(xù)活化和浸潤有關(guān)。本實驗中發(fā)現(xiàn)，Survivin在進(jìn)行期尋常型銀屑病皮損中呈陽性表達(dá)。主要表達(dá)在角質(zhì)形成細(xì)胞各層及血管內(nèi)皮細(xì)胞中。而在正常皮膚組織中僅有基底層的弱表達(dá)或不表達(dá)。兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與國外研究結(jié)果一致。以上結(jié)果表明，Survivin的高表達(dá)在銀屑病的發(fā)病中發(fā)揮著一定的作用，它不僅與銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞的異常及炎細(xì)胞浸潤有關(guān)，而且可能與乳頭層毛細(xì)血管增生、擴(kuò)張密切相關(guān)。

本實驗中發(fā)現(xiàn)，VEGF和Survivin在尋常型銀屑病皮損中呈陽性表達(dá).且兩者表達(dá)呈正相關(guān)，表明兩者在銀屑病皮損血管異常改變中可能發(fā)揮著協(xié)同作用。

總之，Survivin及VEGF通過不同方面參與了尋常型銀屑病的發(fā)病，本研究證實了兩者在進(jìn)行期尋常型銀屑病發(fā)病中的作用及相關(guān)性，而兩者在不同類型銀屑病及尋常型銀屑病不同分期中的表達(dá)還需進(jìn)一步研究。

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